本发明公开了一种南极假丝酵母脂肪酶B突变体、改造方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的改造方法为以CALB的结合口袋的构象动力学工程，通过分子动力学模拟，找到能使口袋构象动力学降低的关键位点，并设计最佳突变体，克服了之前的酶EF5只在较低温度下才表现出高的对映体选择性的局限，并通过实验验证。最终得到最佳突变体D223V/A281S，用于催化制备(R)‑3‑取代戊二酸烷基单酯类化合物，在工业化可接受温度(20‑55℃)下其ee<Sub>R</Sub>值可达&gt;99％，产量&gt;55g/L，产率&gt;80.0％，时空产率可达107.54g.L<Sup>‑1</Sup>d<Sup>‑1</Sup>.大大降低了之前的低温条件带来的成本，缩短了生产周期，为(R)‑3‑取代戊二酸烷基单酯类化合物的工业化奠定了基础。

本发明公开了一种南极假丝酵母脂肪酶B突变体、改造方法及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的改造方法为以CALB的结合口袋的构象动力学工程，通过分子动力学模拟，找到能使口袋构象动力学降低的关键位点，并设计最佳突变体，克服了之前的酶EF5只在较低温度下才表现出高的对映体选择性的局限，并通过实验验证。最终得到最佳突变体D223V/A281S，用于催化制备(R)‑3‑取代戊二酸烷基单酯类化合物，在工业化可接受温度(20‑55℃)下其eeR值可达>99％，产量>55g/L，产率>80.0％，时空产率可达107.54g.L‑1d‑1.大大降低了之前的低温条件带来的成本，缩短了生产周期，为(R)‑3‑取代戊二酸烷基单酯类化合物的工业化奠定了基础。